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本文標(biāo)題:細(xì)菌、植物細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞-生物學(xué)技術(shù)分析

信息分類:站內(nèi)新聞　新聞來(lái)源：未知發(fā)布時(shí)間：2017-10-24 0:59:21

細(xì)菌、植物細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞-生物學(xué)技術(shù)分析

應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)分析復(fù)雜的基因組，首先必須制備純的高

分子量DNA。

從細(xì)菌、植物細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的基因組DNA的純化方法開(kāi)

始，這些方法由兩部分組成：先是溫和裂解細(xì)胞及溶解DNA的技術(shù)

，接著采用幾種化學(xué)和酶學(xué)方法中的任一種，以去除雜蛋白、RNA

及其他的大分子。這里所述的基本方法廣泛適用于各種起始材料。

本章還簡(jiǎn)要地匯編了進(jìn)一步純化和濃縮核酸的一般方法。

實(shí)際上分子生物學(xué)的所有方法從某種程度上講都需要進(jìn)行核酸

的分級(jí)分離。層析技術(shù)對(duì)于某些應(yīng)用是合適的，比如分離雙鏈核酸

和單鏈核酸、分離質(zhì)粒與基因組DNA以及從細(xì)胞裂解物碎片中分離

基因組DNA。然而，凝膠電泳法因比其他方法具有更高的分離度，

因而成為一般情況下首選的分離方法。凝膠電泳分離法既可以是分

析型的，也可以是制備型的。

總的來(lái)說(shuō)，應(yīng)用凝膠電泳技術(shù)分離核酸比分離蛋白質(zhì)要容易。

核酸是帶均勻負(fù)電荷的分子,基本不存在影響遷移率的復(fù)雜結(jié)構(gòu)。

影響核酸在凝膠上的遷移有多種重要的變量，這些變量包括：核酸

的構(gòu)象、凝膠孔徑的大小、所用的電壓梯度以及緩沖液的鹽濃度，

其中最基本的是凝膠孔徑的大小，它決定了能被分離的片段的大小

。在實(shí)際操作中，這意味著較大孔徑的瓊脂糖凝膠用于分離>500--

10 000 bp的片段，而較小孔徑的聚丙烯酰胺凝膠或篩分型瓊脂糖

凝膠則用于分離<1 000 bp的片段。

通常需從凝膠電泳分離的復(fù)雜的混合物中鑒別出某個(gè)特定的片

段，這可以采用Southern雜交技術(shù)來(lái)完成，即先將所有片段從凝膠

上轉(zhuǎn)移至尼龍膜或硝酸纖維素膜上，然后用標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜

交，以鑒別出目的片段。本章全面總結(jié)了固定已分離的DNA片段的

方法與所需材料及相關(guān)的雜交技術(shù)。這些方法為對(duì)復(fù)雜基因組中的

單拷貝或多拷貝序列進(jìn)行定位作圖及鑒別作出了巨大貢獻(xiàn)，并且促

進(jìn)了最初的真核基因克隆實(shí)驗(yàn)的完成。